本試劑盒采用SDS堿裂解法，結(jié)合DNA 制備膜選擇性吸附DNA。同時采用特殊溶液（Buffer ETR 和 Buffer PF）有效去除內(nèi)毒素，可從1-4 ml（OD₆₀₀為1-1.5）細菌培養(yǎng)物中提取出多至30 μg高純度質(zhì)粒DNA，其內(nèi)毒素水平控制在0.1 EU/μg以下。

一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性

RNase A：50 mg/ml，室溫可貯存6個月，長期貯存于-20 ℃ 。

Buffer S1：細菌懸浮液。加入 RNase A后，混合均勻，4℃貯存。

Buffer S2：細菌裂解液（含SDS/NaOH），室溫密閉貯存。

Buffer S3：中和液，室溫密閉貯存。

Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。

Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（可用100%乙醇或 95%乙醇）?；旌暇鶆?，室溫密閉貯存。

ET-free water（70% Ethanol）：使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（可用100%乙醇或95%

乙醇）?；旌暇鶆?，室溫密閉貯存。

Eluent A：洗脫液。室溫密閉貯存。

Buffer ETR：內(nèi)毒素去除液。室溫密閉貯存。

Buffer PF：分相緩沖液。室溫密閉貯存。

二、注意事項

1. 細菌過量將影響細菌裂解、質(zhì)粒DNA 的釋放，導致內(nèi)毒素含量過高。

2. 步驟3和步驟4的操作必須溫和。劇烈搖晃將導致基因組 DNA 的污染。但混合必須充分，否則影響得率。

3. 使用前，檢查Buffer S2 是否出現(xiàn)沉淀，如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)于37℃溫浴加熱溶解并冷卻至室溫后使用。

4. Buffer S2 、Buffer S3和 Buffer W1和 Buffer B含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和防護眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣物，謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)療咨詢。

三、實驗準備

1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1中 ，4℃貯存。

2. 準備無核酸和核酸酶污染的Tip 頭、離心管。

3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定體積的無水乙醇。

4. 第一次使用前，ET-free water（70%Ethanol）中加入指定體積的無水乙醇。使用前置于-20℃預冷。

5. Eluent A在 65℃預熱后使用，能提高質(zhì)粒得率。

6. Buffer ETR 使用前放到4℃預冷。