產(chǎn)品概述：
本試劑盒采用獨特的裂解和蛋白酶K消化技術(shù)，結(jié)合 DNA 制備膜選擇性地吸附DNA的方法達到純化基因組DNA的目的。每次制備可獲得多至20 μg的基因組 DNA。 用于PCR、Southern印跡分析、RAPD 、RFLD 等分子生物學(xué)實驗。
一、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性
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Cat.No. |
UE-MN-MS -GDNA-10 |
UE-MN-MS -GDNA-50 |
UE-MN-MS -GDNA-250 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
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Miniprep column |
10 |
50 |
250 |
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2 ml Microfuge tube |
20 |
100 |
500 |
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1.5 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
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RNase A |
12 μl |
60 μl |
300 μl |
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Buffer C-L |
2 ml |
9 ml |
45 ml |
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Proteinase K |
4 mg |
18 mg |
90 mg |
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PK Buffer |
260 μl |
1.2 ml |
6 ml |
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Buffer P-D |
5 ml |
25 ml |
125 ml |
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Buffer W1 |
6 ml |
30 ml |
145 ml |
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Buffer W2 concentrate |
5 ml |
24 ml |
120 ml |
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Eluent |
3 ml |
12 ml |
60 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
Miniprep column：小量制備管。室溫密閉貯存。
RNase A：50 mg/ml，室溫保存。
Buffer C-L：裂解液，室溫密閉貯存。
Proteinase K：凍干的蛋白酶K可室溫貯存6個月，長時間保存請置于4℃；溶解后，在2-8℃可貯存2個月，長時間保存請勿置于室溫中。
Buffer PK：蛋白酶K溶解液，室溫密閉貯存。
Buffer P-D：蛋白去除液，室溫密閉貯存。
Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate：去鹽液。使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇，混合均勻，室溫密閉貯存?？捎?00%乙醇或95%乙醇。
Eluent：2.5 mM Tris-HCI，pH 8.5，室溫密閉貯存。
二、注意事項
Buffer C-L 、Buffer P-D 和Buffer W1 含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量水沖洗，必要時尋求醫(yī)療咨詢。
常見問題解答：
◆洗脫產(chǎn)物的DNA量很少或沒有
·所提樣品材料老化或反復(fù)凍融導(dǎo)致基因組DNA含量下降
應(yīng)選擇新鮮的樣品材料，如新鮮血液、新鮮菌液、剛離體的動物組織或幼嫩的植物組織等，不能及時處理的樣品應(yīng)立即放入液氮或-70℃低溫保存，以免DNA降解。
·樣品過多導(dǎo)致細胞處理不完全
樣品破壁或裂解不完全導(dǎo)致基因組DNA未充分釋放動、植物材料應(yīng)在液氮中充分研磨勻漿
·DNA洗脫效率不高
W2中沒有加無水乙醇或者使用了低濃度的乙醇代替無水乙醇。最后一次buffer W2洗滌完后不要將制備管放于負壓裝置上抽的過干。洗脫液pH值過低會降低洗脫效率，應(yīng)確保洗脫液pH值7.0-8.5之間；洗脫時可將洗脫緩沖液在65℃水浴預(yù)熱，加入洗脫液后在室溫靜置2-5分鐘，可提高洗脫效率，提高基因組DNA的產(chǎn)量。
◆A260/280比值過低
·樣品量過多導(dǎo)致細胞裂解不充分
樣品量過多從而導(dǎo)致樣品裂解不徹底，殘留大量蛋白、多糖、脂類等雜質(zhì)，為后續(xù)吸附柱分離純化造成影響。應(yīng)加入適當量的樣品材料。
◆RNA污染 (A260/280比值偏高)
·RNase A可能失活
RNase A需按照說明書或者標簽指示保存。低溫保存時RNase A比較穩(wěn)定，不易失活，但如果反復(fù)凍融會導(dǎo)致RNase A降解失活，所以應(yīng)妥善保存。
忘記使用RNase A
◆基因組DNA有降解
·完全降解的基因組DNA在凝膠電泳上會出現(xiàn)模糊的條帶或者是拖尾現(xiàn)象。
選取的材料不新鮮或反復(fù)凍融，采集材料后未及時處理或未低溫保存。陳舊血液、老化菌液等不新鮮的材料中，細胞凋亡導(dǎo)致DNA降解，或低溫保存的樣品反復(fù)凍融導(dǎo)致細胞破碎，內(nèi)源核酸酶降解DNA，因此應(yīng)選擇新鮮的材料樣品，不能及時處理則低溫保存，運輸過程中亦應(yīng)使用干冰。
·未能有效抑制內(nèi)源核酸酶作用
某些DNase含量較豐富的動、植物組織樣品應(yīng)在液氮中研磨或勻漿，研磨過程中應(yīng)隨時補充液氮，并在樣品未完全解凍前即加入含有抑制核酸酶作用的鰲合劑的裂解液。
·操作過于劇烈導(dǎo)致DNA被機械打斷。
◆基因組DNA酶反應(yīng)效果不佳
·DNA純度低
樣品過多導(dǎo)致裂解不充分，從而引起大量蛋白、多糖、脂類等雜質(zhì)殘留，影響后續(xù)酶切反應(yīng)效果?？蛇m當減少樣品初始量。
·鹽分污染
可以用2× Buffer W2進行洗滌
·乙醇污染
在最后一次 Buffer W2 洗滌后可將制備管由原來離心1min增加至離心2min。
◆制備管堵孔
·樣品過多
·裂解不充分
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