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產(chǎn)品概述：
本試劑盒適合從各種瓊脂糖凝膠中回收多至8 μg DNA（70 bp-10 kb），回收率為60-85%。瓊脂糖凝膠在溫和的緩沖液（DE-A溶液）中熔化，其中的保護(hù)劑能防止線狀DNA在高溫下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA選擇性結(jié)合到膜上。純化的DNA純度高，并保持片斷完整性和高生物活性，可直接用于連接、體外轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增、測序、微注射等分子生物學(xué)實驗。
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一 、試劑盒組成、貯存、穩(wěn)定性 |
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Cat.No. |
UE-GX-10 |
UE-GX-50 |
UE-GX-250 |
UE-GX-500 |
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Kit size |
10 preps |
50 preps |
250 preps |
500 preps |
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Miniprep column C15 |
10 |
50 |
250 |
500 |
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2 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
500 |
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1.5 ml Microfuge tube |
10 |
50 |
250 |
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Buffer DE-A |
14 ml |
2×33 ml |
2×165 ml |
2×330 ml |
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Buffer DE-B |
7 ml |
33 ml |
165 ml |
330 ml |
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Buffer W1 |
6 ml |
28 ml |
145 ml |
280 ml |
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Buffer W2 concentrate |
5 ml |
24 ml |
2×72 ml |
2×120 ml |
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Eluent |
1 ml |
5 ml |
25 ml |
50 ml |
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Protocol manual |
1 |
1 |
1 |
1 |
Buffer DE-A：凝膠熔化劑，含DNA保護(hù)劑，防止DNA在高溫下降解。室溫密閉貯存。
Buffer DE-B：結(jié)合液（促使大于70 bp的DNA片段選擇性結(jié)合到DNA制備膜上）。室溫密閉貯存。
Buffer W1：洗滌液，室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate：去鹽液，使用前，按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇（用100%乙醇或95%乙醇），混合均勻，室溫密閉貯存。
Eluent：洗脫液，室溫密閉貯存。
二、注意事項
1. Buffer DE-A(含有β-巰基乙醇)、Buffer DE-B 含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，謹(jǐn)防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫(yī)療咨詢。
2. 在凝膠回收步驟1中，將凝膠切成細(xì)小的碎塊可大大縮短凝膠熔化時間(線型 DNA長時間暴露在高溫條件下易于水解)，從而提高回收率。勿將含 DNA 的凝膠時間地暴露在紫外燈下，減少紫外線對 DNA造成的損傷。
3. 在凝膠回收步驟2中，凝膠必須完全熔化，否則將嚴(yán)重影響 DNA 回收率。
4. 如果回收率較低，可在膠充分溶解后檢測pH值，如果pH大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加3M 醋酸鈉調(diào)節(jié)pH至4-6之間。
5. 將 Eluent 或去離子水加熱至 65°C，有利于提高洗脫效率。
6. DNA分子呈酸性，建議在 2.5 mM Tris-HCl，pH 7.0-8.5 洗脫液中保存。
7. 回收率低建議：
1）步驟3之后混合液轉(zhuǎn)移至制備柱可以放置2-5 min；
2）步驟3之后混合液過柱離心之后將濾液再次重復(fù)離心；
3）加熱洗脫液溫度；
4）洗脫液二次重復(fù)洗脫。
常見問題解答：
◆回收率低
·目的片段結(jié)合量低
通常這是因為樣品中瓊脂糖過多或者質(zhì)量不好或者溶解不充分所導(dǎo)致。
對于小于400bp的片段回收時未加異丙醇會降低片段的結(jié)合量，因此要務(wù)必確保已加入了1倍體積量的異丙醇（100%）。
電泳緩沖液PH值過高，影響目的片段的結(jié)合。
·結(jié)合的DNA片段過早的被洗脫
buffer W2 中未加無水乙醇或者加入的乙醇不是95-100%的，都將會導(dǎo)致DNA片段在后續(xù)的洗滌過程中過早的被洗脫下來。因此要務(wù)必確保加入了正確的乙醇量。每次使用后應(yīng)擰緊瓶蓋，以免乙醇揮發(fā)，降低回收率。
·洗脫效率低
最后一次buffer W2洗滌完后不要將制備管放于負(fù)壓裝置上抽的過干。為了提高洗脫效率可將洗脫液在65℃預(yù)熱。若用去離子水洗脫，請確保其PH值在7.0-8.5之間。
選用合適濃度的瓊脂糖凝膠電泳，上樣量不超過制備管的最大結(jié)合量（8ug）。切膠要迅速，防止紫外線對DNA的損傷。
◆酶切反應(yīng)不理想
·鹽分殘留
可以用2×Buffer W2進(jìn)行洗滌
·乙醇?xì)埩?/strong>
在最后一次Buffer W2洗滌后可將制備管由原來離心1min增加至離心2min。
·瓊脂糖殘留
為了確保完全去除瓊脂糖，應(yīng)確保瓊脂糖塊在Buffer DE-A中完全溶解。切膠時盡可能只保留含有DNA片段部分的凝膠以便于對瓊脂糖的處理。
·瓊脂糖凝膠電泳呈小彌散帶
可能洗脫產(chǎn)物中含有ssDNA，需將洗脫產(chǎn)物95度加熱2min，慢慢冷卻至室溫，使單鏈DNA重新退火即可。
◆膜脫落
·瓊脂糖有殘留，堵塞膜孔，導(dǎo)致膜在高速離心時受力過大，引起膜脫落或者膜下端突出，影響DNA回收
◆UE質(zhì)粒小量制備試劑盒中的制備管能否與UE DNA凝膠回收試劑盒中的制備管替換使用？
不能。兩種制備管都是基于硅膠膜技術(shù)，但是各自的制備管只有與各自試劑盒中的試劑盒配套才能達(dá)到最佳效果。質(zhì)粒小量試劑盒結(jié)合能力最大為20μg，最長的質(zhì)粒片段為50kb。膠回收試劑盒最大結(jié)合能力為8μg，最長的DNA結(jié)合片段為10kb。
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