產(chǎn)品概述：
儲(chǔ)存條件
-20℃保存，有效期見(jiàn)外包裝
應(yīng)用范圍
真核基因表達(dá)調(diào)控研究
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 快速：細(xì)胞裂解在10-15 min內(nèi)完成。
2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測(cè)步驟簡(jiǎn)單。
3. 靈敏：能夠檢測(cè)最低10-20 mol的螢光素酶。
4. 酶的濃度線性范圍可達(dá)8個(gè)數(shù)量級(jí)。
產(chǎn)品組分
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規(guī)格 組分 |
F6024S（50T） |
F6024M（200T） |
F6024L（5 × 200T） |
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A. 5×Firefly Luciferase Lysis Buffer |
5 mL |
20 mL |
5 × 20 mL |
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B. Firefly Luciferase Assay Buffer |
5 mL |
20 mL |
5 × 20 mL |
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C. D-Luciferin |
1 mg |
4 mg |
5 × 4 mg |
產(chǎn)品介紹
真核基因表達(dá)調(diào)控研究常用的方法是進(jìn)行報(bào)告基因的檢測(cè)，生物發(fā)光法又是報(bào)告基因檢測(cè)最常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉(zhuǎn)化，并發(fā)射出光子。該產(chǎn)品為螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)提供快速、靈敏、穩(wěn)定的檢測(cè)方法。能夠檢測(cè)最低10-20 mol的螢光素酶，在10-14至10-20 mol的酶濃度范圍內(nèi)呈很好的線性關(guān)系。
注意事項(xiàng)
1. 使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 溫度會(huì)對(duì)酶的活性產(chǎn)生影響，因此所有試劑應(yīng)放置室溫后再使用。
3. 如果單管螢光測(cè)定儀測(cè)定，每個(gè)樣品與測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)保持一致。
4. 螢火蟲(chóng)螢光素酶催化的生物發(fā)光的最強(qiáng)波長(zhǎng)為560 nm。
5. 為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。
6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常見(jiàn)問(wèn)題解答：
◆檢測(cè)的螢光數(shù)值很低怎么辦？
(1）可能為轉(zhuǎn)染效率低
a.優(yōu)化轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件，用較易轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒做陽(yáng)性對(duì)照（如轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)熒光蛋白質(zhì)粒）；
b.確保轉(zhuǎn)染DNA的質(zhì)量，可通過(guò)酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對(duì)DNA質(zhì)量進(jìn)行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數(shù)分裂期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
(2）可能為啟動(dòng)子活性低或誘導(dǎo)失敗
a.轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)使用特異性誘導(dǎo)啟動(dòng)子的條件；
b.優(yōu)化細(xì)胞的培養(yǎng)條件，提高螢光素酶的表達(dá)量；
c.更換強(qiáng)啟動(dòng)子（如SV40、CMV）。
注：海腎螢光素酶基因作為內(nèi)對(duì)照，其表達(dá)應(yīng)不受時(shí)期、部位、環(huán)境影響，因此常用組成型表達(dá)的TK啟動(dòng)子。
(3）樣品裂解效率低
a.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，12-36h內(nèi)最好，長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后，細(xì)胞可能會(huì)難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細(xì)胞能夠充分裂解。
(4）檢測(cè)過(guò)程操作不規(guī)范
a.選擇合適的檢測(cè)儀器，能夠檢測(cè)化學(xué)發(fā)光或者生物發(fā)光的儀器都適用于該實(shí)驗(yàn)；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)很大偏差；
c.室溫反應(yīng)。反應(yīng)時(shí)各個(gè)組分（細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等）都需要調(diào)整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測(cè)，盡量在30min內(nèi)完成。
(5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲(chóng)熒光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應(yīng)工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配。
◆進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，螢光信號(hào)值太高該如何進(jìn)行調(diào)整？
（1） 減少質(zhì)粒轉(zhuǎn)染量。
（2）細(xì)胞樣品裂解后，離心取上清后檢測(cè)或?qū)α呀猱a(chǎn)物進(jìn)行稀釋后檢測(cè)。
注：不建議通過(guò)減少底物量來(lái)降低熒光值，需要保證底物的飽和來(lái)反映螢光素酶真實(shí)的表達(dá)水平，否則會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)大的偏差。
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