產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品參數(shù)
外觀：可溶于DMSO 的灰白色固體
CAS號：148504-34-1
Ex/Em：494/517 nm (pH =8)
分子式：C46H46N2O23
分子量：994.9
分子結(jié)構(gòu)圖：
儲存條件
-20℃ 避光保存，有效期見外包裝。
產(chǎn)品介紹
Calcein AM 是一種對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，它可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成 Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein AM 的細(xì)胞毒性很低。Calcein 的激發(fā)和發(fā)射波長分別為 490 nm 和 515 nm。Calcein AM 僅對活細(xì)胞染色。可與 PI 聯(lián)用，用于區(qū)別活細(xì)胞和死細(xì)胞。由于不同細(xì)胞系的最佳染色條件不同，我們建議根據(jù)實際情況確定 Calcein AM 的最適濃度。
注意事項
1. Calcein AM 的酯鍵遇到濕氣會分解，使用后請在 -20℃ 下密閉冷凍保存，防止水分進(jìn)入。
2. Calcein AM 儲備液稀釋后請及時使用，盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
常見問題解答：
◆細(xì)胞追蹤有很多產(chǎn)品，該如何選擇？
首先確定追蹤細(xì)胞的時間，然后考慮染料結(jié)合機(jī)制。
1.鈣黃綠素染料（C4041）標(biāo)記均勻且對短期細(xì)胞遷移示蹤效果極佳，但也會被某些類型細(xì)胞迅速外排。
2.親脂性的花青素染料，如DiI（D4010），DIO（D4007），DiA(D4059)，DiD(D4019)，DiR(D4006)能標(biāo)記細(xì)胞膜而不破壞其功能，并且能持續(xù)更長時間，但如果發(fā)生膜融合則可能會染上其他細(xì)胞。此外，它們還會在透化過程中丟失。
3.CellTracker染料（C4060）更有利于長期標(biāo)記，其帶有溫和的氯甲基反應(yīng)基團(tuán)使之能夠與細(xì)胞組分共價結(jié)合。
4.CFDA SE（C4070）也能共價地結(jié)合于細(xì)胞組分。
在所有列出的試劑中，細(xì)胞內(nèi)保留與否取決于細(xì)胞分裂的速率和細(xì)胞的固有特性（主動外排，膜和蛋白質(zhì)的周轉(zhuǎn)率等）。其中共價結(jié)合試劑比非共價結(jié)合的試劑展現(xiàn)出更長的保留時間
◆用Calcein，AM標(biāo)記了細(xì)胞，但是第二天成像時，沒有來自Calcein的熒光，為什么？
Calcein，AM是細(xì)胞追蹤和普通細(xì)胞質(zhì)染色的良好選擇，然而，它不與任何東西結(jié)合，可能會在幾個小時內(nèi)被主動抽出細(xì)胞，鈣黃綠素在活細(xì)胞內(nèi)的保留取決于細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件的固有特性
對于長期成像，您可能希望考慮反應(yīng)性細(xì)胞質(zhì)染色，如CFDA，SE染料
◆我想在活細(xì)胞中加入一種染料，使其在高濃度下自猝滅，但如果細(xì)胞死亡，染料將被釋放并取消猝滅。有這樣的嗎？
可以的，這通常是通過鈣黃綠素AM或FDA（熒光素二乙酸酯）完成的。這些染料在被酯酶分解之前不會發(fā)出熒光。經(jīng)酯酶修飾后，在非常高的濃度下，它們會自我猝滅。一旦質(zhì)膜破裂或細(xì)胞死亡，染料將被釋放到細(xì)胞外介質(zhì)中，并變得不猝滅。必須優(yōu)化濃度和培養(yǎng)時間，以獲得足夠的淬火效果
◆當(dāng)我用鈣黃綠素 AM對細(xì)胞進(jìn)行染色時，細(xì)胞經(jīng)過固定處理后信號就消失了，為什么？
Calcein AM擴(kuò)散到細(xì)胞中，“AM”部分由細(xì)胞酯酶裂解，隨后染料分子的熒光信號可以在細(xì)胞質(zhì)中被觀測到，但其不結(jié)合到細(xì)胞組分。這意味著它們能夠為“整個細(xì)胞”染色。這也意味著染料不能通過醛類固定劑進(jìn)行交聯(lián)，因此染料會在固定時丟失。此外，質(zhì)膜的任何干擾（例如去垢劑或胰蛋白酶處理）都會導(dǎo)致染料從細(xì)胞中滲漏。
◆想做一個細(xì)胞遷移研究大約4個小時，需要用染料熒光標(biāo)記細(xì)胞，您有什么推薦的嗎？
Calcein AM和FDA（熒光素二乙酸鹽）是用于該應(yīng)用的一些染料的實例，由于這些染料不與任何細(xì)胞組分結(jié)合或共價連接，它們可能具有短的保留時間，因為一些細(xì)胞類型可能主動將染料從細(xì)胞中流出
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